一、技术背景
糖苷酶(Glycosidase)，是一类催化水解糖苷键的酶，该过程不需要任何辅酶及辅因子。α-L-鼠李糖苷酶（EC 3.2.1.40）能够特异性地从柚皮苷、芦丁、槲皮苷、橙皮苷、二烯、萜烯苷和其它许多含有末端α-L-鼠李糖的天然糖苷中切割末端α-L-鼠李糖。
α-L-鼠李糖苷酶的真菌来源丰富，包括曲霉、孢霉、青霉、根霉和木霉等。α-L-鼠李糖苷酶(RhaB)由1个α结构域和5个β结构域组成。结构域A为桶状结构，结构域N、F、D、E共同形成β-卷心折叠。结构域A和结构域D中结合有L-鼠李糖，是该酶的活性中心，决定了酶的活力大小。
α-L-鼠李糖苷酶主要通过微生物发酵法获得，但该方法存在发酵活力低、产量低、生产成本高等限制性因素，限制了它的广泛应用。
目前，α-L-鼠李糖苷酶的发酵技术不成熟、制剂工艺缺乏，导致成品酶价格高昂，严重限制了酶的应用。国内外关于α-L-鼠李糖苷酶的液态发酵的研究主要为实验室规模，工业级规模缺乏报道。开发难点主要是：缺乏高产酶菌株；工业化生产技术还存在很多缺陷，成本偏高、效率低下。
二、技术原理
构建了一株鼠李糖苷酶高效生产菌种：细丽毛壳菌重组菌；优化了发酵工艺路线，建立了发酵过程控制策略，喷粉后酶活高达3500 U/ml，生产成本约为750元/Kg（市场鼠李糖苷酶价格1100元/Kg），产品指标达到国内先进水平。
（1）酵母菌表达系统方面，主要分为固态发酵和液态发酵。固态发酵最高酶活为4 U/mg，液态发酵最高酶活为691 U/mL。
（2）真菌表达系统方面，利用霉菌进行固态发酵产α-L-鼠李糖苷酶，最高酶活为794 U/mL。
关键技术的研发：
（1）重组菌构建
利用根癌农杆菌转化系统，构建含有α-L-鼠李糖苷酶基因的重组质粒；将质粒导入到农杆菌感受态细胞中，并将宿主菌细丽毛壳菌悬液与根瘤农杆菌菌液混匀共培养，获得含有α-L-鼠李糖苷酶的重组细丽毛壳菌。这个方法在α-L-鼠李糖苷酶的菌种构建领域国内外还没有类似报道。
（2）独特的高效发酵工艺
特别添加α-L-鼠李糖苷酶底物柚皮苷，不但起到丰富碳源的作用，还是有效的α-L-鼠李糖苷酶诱导剂；采用半连续流加发酵策略，在保持最佳碳氮源比例的同时，持续诱导重组菌产生α-L-鼠李糖苷酶。本发酵工艺已经申报专利，具有创新性。
（3）全水化提取工艺
首先采用板框去除菌体，然后用超滤膜过滤浓缩，最后用喷粉塔造粉成品。整个过程全部采用水化处理，避免了乙醇等有机溶剂的污染，提取工艺环保、友好。
三、应用影响
鼠李糖苷酶用于去除柑橘汁中柚皮苷的苦味；还可以作用于葡萄酒增香；还可以用于在沙棘黄酮的生物转化，提高黄酮类物质的活性；还可以用于水解皂苷，合成类固醇药物。
柑橘汁脱苦：柑橘类果实经压榨制得的果汁会出现苦味，柚皮苷是引起苦味的关键物质，α-L-鼠李糖苷酶能够把柚皮苷水解为普鲁宁和α-L-鼠李糖，减少苦味口感。
葡萄酒增香：葡萄酒的香气来源于香茅醇和β-萜烯醇等挥发性物质。在α-L-鼠李糖苷酶和其他酶的联合作用下，可以水解葡萄皮中二糖苷并释放挥发性萜烯醇，实现葡萄酒增香。
药物和药物前体的制备：鼠李糖是重要的手性中间体，而α-L-鼠李糖苷酶可以从含有末端L-鼠李糖的糖苷中切割L-鼠李糖。如水解皂苷，产生α-L-鼠李糖和薯蓣皂苷元，可用于合成临床上的类固醇药物，例如孕酮等。
